در حوزه تشخیص مولکولی بیماری ها، تکنیک های مختلفی به منظور شناسایی مارکرهای بیولوژیکی بکار گرفته می شوند. یکی از این تکنیک ها ریل تایم پی سی آر است که برای شناسایی DNA ژنومی هدف استفاده می شود. ریل تایم پی سی آر انواع مختلفی دارد اما بیشتر نوع این تکنیک که در تشخیص استفاده می شود Probe-based real-time PCR است. معمولا در این روش از پروب های TaqMan استفاده می شود. روش TaqMan real-time PCR یک روش بسیار حساس، اختصاصی و سریع می باشد. برای انجام این روش، ابتدا DNA ژنومی استخراج میشود و بدنبال آن، واکنش تکثیر هدف ژنومی انجام میشود. بهمنظور شناسایی ناحیهی هدف از یک ست پرایمر و پروب “تک من” اختصاصی الیگونوکلئوتیدی دارای فلوروفور و کوئنچر (خاموش کننده) استفاده میشود. پروب که دارای فلوروکروم (مانند FAM یا VIC) است جهت شناسایی ژن هدف استفاده میشود. حین انجام PCR در صورت وجود ژنوم هدف، پرایمرها و پروبهای اختصاصی به نواحی مربوطه متصل میشوند. بهمنظور تکثیر DNA هدف، آنزیم پلیمراز فعال شده و شروع به سنتز رشتههای جدید میکند. در حین سنتز رشتههای جدید، این آنزیم با استفاده از فعالیت اگزونوکلئازی باعث هیدرولیز پروبهای متصل شده به نواحی هدف مربوطه شده و در نتیجه کوئنچر از فلوروفور جدا شده و در نتیجه رنگهای فلوروسنت مختلف آزاد میشوند که دستگاه Real-time PCR قادر به خوانش و ثبت آنها میباشد. در نهایت بعد از پایان واکنش PCR نتایج با استفاده از نرم افزار مربوطه آنالیز میشوند.
تشخیص مولکولی در پزشکی
18
سپتامبر